انتقال ژن سنتتیک برازئین و بررسی آن در باکتری اشیرشیاکلی

چکیده وجود غذاهای کم قند با طعم و کیفیت بالا به عنوان رژیم غذایی در افراد مبتلا به بیماری دیابت مهم است.پروتئین¬های شیرین به دلیل کیفیت خوب و کالری پایینشان قابلیت استفاده به جای ساکارز را دارند. پروتئین برازئین از یک میوه خوراکی به دست می¬آید و به عنوان یک شیرین کننده¬ی بالقوه¬ی تجاری استفاده می¬شود. ویژگی¬های منحصر به فرد پروتئین برازئین شامل اندازه کوچک آن (53 باقی¬مانده اسید آمینه)، پایداری بالای آن در محدوده وسیعی از دما و ph، و مشابهت شیرینی آن با ساکارز است. برازئین به عنوان یک پروتئین شیرین به طور طبیعی در یک گیاه گرمسیری وجود دارد و تولید اقتصادی آن در مقیاس بزرگ غیر عملی است، بنابراین قابلیت دسترسی آن برای استفاده در محصولات غذایی محدود است. همچنین استخراج برازئین از منابع طبیعی آن گران است و بنابراین از لحاظ اقتصادی قابل اجرا نیست. باکتری¬ها برای تولید پروتئین¬های نوترکیب ساده و مقرون به صرفه هستند. در این مطالعه با استفاده از تکنولوژی dnaی نوترکیب یک روش متفاوت برای تولید انبوه و ارزانتر از برازئین فراهم کردیم. ژن برازئین طراحی، سنتز و سویه بیانی برازئین فاقد پیروگلوتامات ساخته و در بانک ژن با کد kf013250.1ثبت شد. پروتئین نوترکیب برازئین به صورت فرم محلول بعد از القاء توسط iptg بیان شد. این پروتئین نوترکیب به وسیله¬ی ستون کروماتوگرافی تمایلی با نیکل آگارز تخلیص و بیان توسط ژل sds-page شناسایی شد. بررسی¬ها نشان داد که در دمای 32 درجه سانتیگراد، بیان فراورده برازئین به صورت محلول و در مقدار نسبتا زیاد انجام گرفته است. کلمات کلیدی: پروتئین¬های شیرین، پروتئین برازئین، تکنولوژی dnaی نوترکیب، پروتئین نوترکیب.